Ȩ  »óÇ°¸®½ºÆ® ÁÖ¹®¾È³»  ¸µÅ©  °øÁö»çÇ×  È¸»ç¼Ò°³ 

BGSTAR A kit »ç¿ë¼³¸í¼­

Åõ±¸°ÔÀÇ Ç÷±¸ÃßÃâ¹°Àº Endotoxin¿¡ ´ëÇØ °í°¨µµ·Î ¹ÝÀÀÇÏ¿© Endotoxin °ËÃâ½Ã¾àÀ¸·Î¼­ ´Ù¾çÇÑ ºÐ¾ß¿¡¼­ ÀÌ¿ëÇÏ°í ÀÖ½À´Ï´Ù. ¶ÇÇÑ Åõ±¸°Ô Ç÷±¸ÃßÃâ¹°Àº Endotoxin»Ó¸¸ ¾Æ´Ï¶ó b-Glucan¿¡ ´ëÇؼ­µµ °í°¨µµ·Î ¹ÝÀÀÇÕ´Ï´Ù. º»Á¦Ç°Àº Åõ±¸°Ô Ç÷±¸ÃßÃâ¹°¿¡¼­ Endotoxin °¨¼ö¼º ÀÎÀÚ ¹× CoagulogenÀ» Á¦°ÅÇÏ°í ¹ß»öÇÕ¼º±âÁúÀ» ÷°¡ÇÑ ÁÖÁ¦¿Í Ç¥ÁØ Curdlan ¹× Diazo coupling ¹ß»ö¿ë ½Ã¾àÀ» ¼¼Æ®·ÎÇÑ b-Glucan ÃøÁ¤¿ë ½Ã¾à ¼¼Æ®ÀÔ´Ï´Ù. º»Á¦Ç°Àº Endotoxin °¨¼ö¼º ÀÎÀÚ¸¦ Æ÷ÇÔÇÏÁö ¾ÊÀ¸¹Ç·Î Endotoxin¿¡´Â °¨¼ö¼ºÀ» º¸ÀÌÁö ¾ÊÀ¸¸ç b-Glucan¿¡ ´ëÇؼ­¸¸ ƯÀÌÀûÀ¸·Î ¹ÝÀÀÇÕ´Ï´Ù.

Å°Æ®ÀÇ ±¸¼º

* b-Glucan ƯÀÌ°ËÃâ½Ã¾à BGSTAR ÁÖÁ¦ 1vial
20Å×½ºÆ®¿ë µ¿°á°ÇÁ¶Ç°
Åõ±¸°Ô Ç÷±¸ÃßÃâ¹°ÀÇ ºÐȹÁ¤Á¦Ç°°ú ¹ß»öÇÕ¼º±âÁúÀ» ÇÔÀ¯

* ÁÖÁ¦ ¿ëÇØ¿ë ¿ÏÃæ¾× 1vial

* Ç¥ÁØ Curdlan 1vial
Curdlan µ¿°á°ÇÁ¶Ç°
¾à 1,000pg(Á¤È®ÇÑ ÇÔ·®Àº º´ÀÇ ¶óº§¿¡ ±âÀç)ÀÇ CurdlanÀ» ÇÔÀ¯

* b-Glucan free water 1vial
15mlÀÇ b-Glucan free water

* ¹ß»ö½Ã¾à 1
Sodium nitrite 4.8mgÀ» ÇÔÀ¯

* ¹ß»ö½Ã¾à 1 ¿ëÇؾ×
0.48N ¿°»ê 12ml¸¦ ÇÔÀ¯

* ¹ß»ö½Ã¾à 2
Ammonium sulfamic acid 36mgÀ» ÇÔÀ¯

* ¹ß»ö½Ã¾à 3
N-1-Naphthylethyldiamine dihydrochloride 8.4mgÀ» ÇÔÀ¯

»ç¿ë¹æ¹ý

1. »ç¿ë ±â±¸
»ç¿ë ±â±¸Áß a¿Í b´Â b-Glucan freeÀÎ °ÍÀ» »ç¿ëÇØ ÁֽʽÿÀ.
À¯¸®±â±¸µî ³»¿­¼ºÀÇ ±â±¸µéÀº 250µµ·Î 2½Ã°£ °Ç¿­¸ê±ÕÀ¸·Î b-Glucan freeÈ­ ÇÒ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
a. ¸Þ½ºÇÇÆê ¶Ç´Â ÇÇÆäÅÍ Ä¨
b. ĸºÎÂø ½ÃÇè°ü
c. Ç׿¼öÁ¶(37µµ¿¡¼­ º¯¿Â »óÇÏ1µµ À̳»·Î »ç¿ë°¡´ÉÇÑ °Í)
d. Èí±¤±¤µµ°è(¾×·® 1.7ml·Î 545nm¿Í 630nmÀÇ 2ÆÄÀå¿¡¼­ ÃøÁ¤ÀÌ °¡´ÉÇÑ °Í)

2. Curdlan Ç¥ÁØÇ° ¿ë¾×ÀÇ Á¶Á¦
a. Ç¥ÁØ Curdlan º´ÀÇ °í¹« ¸¶°³ÀÇ ³»Ãø¿¡ ¼ÕÀÌ ´êÁö ¾Êµµ·Ï ÁÖÀÇÇϸ鼭 °³ºÀÇÏ¿© 2.0mlÀÇ b-Glucan free water¸¦ °¡ÇÏ°í ´Ù½Ã ¸¶°³¸¦ ¸·°í ¾à 1ºÐ°£ °­ÇÏ°Ô Èçµé¾î ¿ÏÀü ¿ëÇؽÃŵ´Ï´Ù. ¿ëÇØÇÑ Ç¥ÁØ Curdlan ¿ë¾×Àº ºù³Ã½ÃÄÑ ÁֽʽÿÀ.
b. a¿¡¼­ Á¶Á¦ÇÑ ¿ë¾×(¾à 500pg/ml ¿ë¾×) 0.2ml¸¦ ĸºÎÂø ½ÃÇè°ü¿¡ ³Ö°í b-Glucan free water 1.8ml¸¦ °¡Çؼ­ ¾à 1ºÐ°£ °­ÇÏ°Ô Èçµé¾î ¾à 50pg/mlÀÇ ¿ë¾×À» Á¶Á¦ÇÕ´Ï´Ù. Á¶Á¦ÇÑ ¾à 50pg/mlÀÇ ¿ë¾×Àº »ç¿ëÇϱâ Àü±îÁö ºù³Ã½ÃÄÑ ÁֽʽÿÀ.

3. ÁÖÁ¦ÀÇ ¿ëÇØ¿Í ÁÖÁ¦¿Í °ËüÀÇ ¹ÝÀÀ
a. ÁÖÁ¦°¡ µé¾îÀÖ´Â º´À» b-Glucan¿¡ ÀÇÇÑ ¿À¿°¿¡ ÁÖÀÇÇϸ鼭 õõÈ÷ °³ºÀÇÏ°í 2.2mlÀÇ ³Ã°¢ÇÑ ÁÖÁ¦ ¿ëÇØ¿ë ¿ÏÃæ¾×À» °¡Çؼ­ ºù³ÃÇÏ¿¡ ¹æÄ¡ÇÕ´Ï´Ù. ¸î ¹ø ²¨³» °ÅÇ°ÀÌ »ý±âÁö ¾Êµµ·Ï ºÎµå·´°Ô Èçµé¾î Áָ鼭 ºù³ÃÇÏ¿¡ 10ºÐ Á¤µµ ¹æÄ¡ÇÏ¿© ¿ÏÀü ¿ëÇØ ½Ãŵ´Ï´Ù. ¿ëÇØÇÑ ÁÖÁ¦´Â »ç¿ëÇϱâ Àü±îÁö ºù³ÃÇÏ¿¡ ¹æÄ¡ÇØ ÁֽʽÿÀ.
b. ĸºÎÂø ½ÃÇè°ü¿¡ ºù³ÃÇÏ¿¡¼­ b-Glucan free water, 2.¿¡¼­ Á¶Á¦ÇÑ ¾à 50pg/mlÀÇ Ç¥ÁØ Curdlan ¿ë¾×, ¶Ç´Â °Ëü ¿ë¾×À» 0.1ml¾¿ ºÐÁÖÇÕ´Ï´Ù.
c. ÁÖÁ¦°¡ ¿ÏÀüÈ÷ ¿ëÇصǾî ÀÖ´Â °ÍÀ» È®ÀÎÇÏ°í ºù³ÃÇÏ¿¡¼­ b.ÀÇ °¢ ½ÃÇè°ü¿¡ ÁÖÁ¦¿ë¾× 0.1ml¸¦ ÷°¡ÇÏ¿© ÃæºÐÈ÷ Èçµé¾î ÁÝ´Ï´Ù.
d. ¹Ù·Î 37µµÀÇ Ç׿¼öÁ¶·Î ¿Å°Ü 30ºÐ°£ ¹æÄ¡ÇÕ´Ï´Ù.

4. ¹ß»ö½Ã¾à ¿ë¾×ÀÇ Á¶Á¦
30ºÐ°£ÀÇ ¹ÝÀÀ½Ã°£Áß ¹ß»ö½Ã¾àÀ» Á¶Á¦ÇÕ´Ï´Ù. ¹ß»ö½Ã¾à ¿ë¾×ÀÇ Á¶Á¦ ÀÌÈÄÀÇ Á¶ÀÛ¿¡ À־´Â b-Glucan freeÀÇ ÇÊ¿ä´Â ¾ø½À´Ï´Ù.
a. ¹ß»ö½Ã¾à 1¿¡ ¹ß»ö½Ã¾à 1 ¿ëÇؾ×ÀÇ Àü·®À» °¡Çؼ­ ¿ëÇؽÃŵ´Ï´Ù.
b. ¹ß»ö½Ã¾à 2, ¹ß»ö½Ã¾à 3¿¡ °¢°¢ 12mlÀÇ Á¤Á¦¼ö¸¦ °¡Çؼ­ ¿ëÇؽÃŵ´Ï´Ù.

5. ¹ÝÀÀ Á¤Áö¿Í Èí±¤µµ ÃøÁ¤
a. 30ºÐ °æ°úÈÄ ¹Ù·Î ºù³ÃÇÏ°í ¹ß»ö½Ã¾à 1 ¿ë¾× 0.5ml¸¦ °¡Çؼ­ ÃæºÐÈ÷ Èçµé¾î ¹ÝÀÀÀ» Á¤Áö½Ãŵ´Ï´Ù.
b. ¹ß»ö½Ã¾à 2 ¿ë¾× 0.5ml¸¦ °¡ÇØ ÃæºÐÈ÷ Èçµé¾î ÁÝ´Ï´Ù.
c. ¹ß»ö½Ã¾à 3 ¿ë¾× 0.5ml¸¦ °¡ÇØ ÃæºÐÈ÷ Èçµé¾î ÁÝ´Ï´Ù.
d. 1½Ã°£ À̳»¿¡ 545nm¿Í 630nmÀÇ Èí±¤µµ¸¦ ÃøÁ¤ÇÏ°í 545nm¿¡¼­ 630nmÀÇ Èí±¤µµ¸¦ »« °ª(A545 - A630)À» ±¸ÇÕ´Ï´Ù. ÀÌ °ªÀ» °ËüÁßÀÇ b-Glucan ³óµµÀÇ »êÃâ¿¡ »ç¿ëÇÕ´Ï´Ù.

6. °Ëü¿ë¾×ÁßÀÇ Ç¥ÁØ Curdlan ȯ»ê b-Glucan ³óµµÀÇ »êÃâ
¾à 50pg/mlÀÇ Ç¥ÁØ CurdlanÀ» ÁÖÁ¦¿Í ¹ÝÀÀ½ÃŲ °ÍÀÇ Èí±¤µµ¸¦ A std, b-Glucan free water¸¦ ÁÖÁ¦¿Í ¹ÝÀÀ½ÃŲ °ÍÀÇ Èí±¤µµ¸¦ A blank, °Ëü¿ë¾×°ú ÁÖÁ¦¸¦ ¹ÝÀÀ½ÃŲ °ÍÀÇ Èí±¤µµ¸¦ A sample, ¾à 50pg/mlÀÇ Ç¥ÁØ Curdlan ¿ë¾×ÀÇ ³óµµ¸¦ C std(pg/ml)·Î¼­ ¾Æ·¡ÀÇ ½ÄÀ¸·Î °Ëü ¿ë¾×ÁßÀÇ Ç¥ÁØ Curdlan ȯ»ê b-Glucan ³óµµÀÇ C sample(pg/ml)¸¦ »êÃâÇÕ´Ï´Ù.
C sample = (A sample - A blank / A std - A blank) x C std

º¸°ü
* 2-8µµ¾¾ÀÇ ¾Ï¼Ò¿¡ º¸°üÇØ ÁֽʽÿÀ.
* ¿ëÇØÇÑ ÁÖÁ¦´Â °¡´ÉÇÑÇÑ Çѹø¿¡ »ç¿ëÇØ ÁֽʽÿÀ. »ç¿ëÇÏÁö ¾Ê°í º¸Á¸ÇÏ´Â °æ¿ì¿¡´Â ¹ÐºÀÇÏ¿© -80µµ¾¾·Î µ¿°á º¸Á¸ÇÏ¿© 1°³¿ù À̳»¿¡ »ç¿ëÇØ ÁֽʽÿÀ. µ¿°á ¿ëÇظ¦ ¹Ýº¹ÇÏÁö ¸¶½Ê½Ã¿À.

»ç¿ë»óÀÇ ÁÖÀÇ
* º»Á¦Ç°ÀÇ ¹ÝÀÀ ¿ø¸®´Â Åõ±¸°ÔÀÇ Ã¼¾×ÀÀ°íÈ¿¼Ò¸¦ ÀÌ¿ëÇÑ °ÍÀ̹ǷΠ°£È¤ Protease, Protease inhibitor, EDTAµîÀÇ chelateÁ¦µî¿¡ ÀÇÇØ ¹ÝÀÀÀÇ ÀúÇسª ÃËÁøÀÌ ÀϾ ¼ö ÀÖ½À´Ï´Ù.
* Ç¥ÁØ Curdlan ¿ë¾×ÀÇ ¿ëÇØ´Â »ç¿ë Á÷Àü¿¡ ÇàÇϸç, ¿ëÇØÇÑ Ç¥ÁØ Curdlan ¿ë¾×Àº ´çÀÏÁß¿¡ »ç¿ëÇØ ÁֽʽÿÀ.
* º»Á¦Ç°Àº ½ÃÇè ¿¬±¸ ¸ñÀûÀÌ¿Ü¿¡ »ç¿ëÇÏ½Ç ¼ö ¾ø½À´Ï´Ù.